Physikalisch-Technische Bundesanstalt

Validierung eines neuen Verfahrens zur DNA-Isolation für die PCR

Genomische DNA muss vor der Amplifikation mittels PCR (Polymerase­kettenreaktion) isoliert und aufgereinigt werden. Üblicherweise wird hierfür die Festphasenextraktion mittels Silikagelmembranen (Adsorptions­chromatographie) eingesetzt. In der Dr. Lerche KG wurde kürzlich ein Alternativ­verfahren entwickelt, welches einen umgekehrten Verfahrensablauf („reverse purification“) durch Anwendung eines neu entwickelten porösen Trägermaterials für die Größenausschlusschromatographie realisiert.  Im Rahmen eines gemeinsamen MNPQ-Projektes wird derzeit die Eignung dieser innovativen Technik hinsichtlich Reinheit und Qualität der gewonnenen hochmolekularen DNA im Vergleich zu kommerziellen Kits untersucht und quantitativ validiert. Die ersten Vergleichsmessungen unter Verwendung von Vollblutproben haben gezeigt, dass die Ausbeuten des neuen Aufreinigungsverfahrens deutlich kleiner sind, als bei für derartige Anwendungen optimierte kommerzielle Kits. Da bei der Untersuchung von Blutproben nur wenig DNA isoliert wird, treten möglicherweise Interferenzen mit Proteinen auf. Um die Auswirkungen derartiger Störungen zu untersuchen, sollen zukünftig auch andere biologische Proben untersuchet werden.

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