Ringversuche zum Kleinen Blutbild, Referenzwertermittlung

Aufgabe

Die PTB liefert Referenzwerte für Ringversuche zum Kleinen Blutbild, die von der Deutschen Vereinten Gesellschaft für Klinische Chemie und Laboratoriumsmedizin e.V. (DGKL) und dem Institut für Standardisierung und Dokumentation im medizinischen Laboratorium e.V. (INSTAND) veranstaltet werden.

Anwendung

Vergleichsmessungen bei Ringversuchen zum Kleinen Blutbild dienen einer externen Qualitätssicherung hämatologischer Laboratorien und sind nach der Richtlinie der Bundesärztekammer (RiliBÄK)¹ zur Qualitätssicherung quantitativer laboratoriumsmedizinischer Untersuchungenvorgeschrieben.

Messgrößen des Kleinen Blutbildes

Messgröße	Kurz- zeichen	Formel- zeichen	Messbereich	Einheit	Erweiterte Mess- unsicherheit (k = 2)
Erythrozyten- konzentration in Blut	RBC	C_Ery	0,5 bis 7	pL^-1	1,5 %
Leukozyten- konzentration in Blut	WBC	C_Leu	£ 5 5 bis 50	nL^-1	0,2 nL^-1 4 %
Thrombozyten- konzentration in Blut	Plt	C_Thr	£ 30 30 bis 1000	nL^-1	3 nL^-1 10 %
Hämoglobin- konzentration	Hb	b_Hb	2,5 bis 25	g dL^-1	1,5 %
Hämatokrit (Volumenanteil der Erythrozyten im Blut)	Hkt	j_Ery	0,1 bis 0,7	L / L	1,5 %
Mittleres Erythrozyten- volumen	MCV*	V_Ery	50 bis 150	fL	2,1 %
Mittlere Hämoglobin- konzentration der Erythrozyten	MCHC*	b_{Hb je Ery}	25 bis 40	g dL^-1	2,1 %
Mittlere Hämoglobin- masse der Erythrozyten	MCH*	m_{Hb je Ery}	20 bis 40	pg	2,9 %

Die mit * gekennzeichneten Parameter werden als Erythrozytenindices bezeichnet und berechnet aus der Konzentration der roten Blutzellen, der Hämoglobinkonzentration und dem Hämatokritwert. Die Kurz- und Formelzeichen sind DIN 58932-2 entnommen.

Messverfahren zur Bestimmung von Referenzwerten

Als Messverfahren zur Konzentrationsbestimmung der roten Blutzellen (Erythrozyten) , der weißen Blutzellen (Leukozyten) und der Blutplättchen (Thrombozyten) wird die Durchflusszytometrie eingesetzt. Dabei wird zunächst eine Messsuspension geeigneter Konzentration durch gravimetrische Verdünnung der Blutprobe hergestellt. Die Konzentration C = N / { V f } der Zellen wird durch Zählung der Anzahl N der Zellen in der Messsuspension in einem definierten Volumen V unter Berücksichtigung des Volumenanteils f der Ausgangsprobe in der Messsuspension bestimmt. Das Volumen der Messsuspension wird durch Wägung oder durch die Verwendung gravimetrisch kalibrierter Spritzen ermittelt. Zur Bestimmung der Hämoglobinkonzentration (Hb) werden durch eine Konversionslösung die roten Blutzellen zerstört und die verschiedenen Hämoglobinverbindungen im Blut in Cyanhämiglobin umgewandelt. Aus dem photometrisch gemessen spektralen Absorptionsmaß dieser Lösung wird die Konzentration des Hämoglobins im Blut berechnet.

Der Volumenanteil der roten Blutzellen im Blut (Hkt) ergibt sich nach Zentrifugation einer Kapillare mit Blut durch die relative Höhe der Säule der Zellen bezüglich der Gesamthöhe der Blutsäule.

Als Grundlage zur Bestimmung der Referenzwerte werden die vom Arbeitsausschuss Hämatologie erstellten Normen des Deutschen Institutes für Normung e.V. angewendet.

Neben der Ermittlung von Referenzwerten zum Kleinen Blutbild werden im Arbeitsgruppe 8.32 der PTB Reagenzien hinsichtlich Ihrer Eignung zur Herstellung von Kontrollblutproben^2,3sowie Kalibrationsmaterialien, zum Beispiel zur Konzentrationsbestimmung von Lymphozyten-Subpopulationen⁴, untersucht.

Erythrozytenindices

Das mittlere Erythrozytenvolumen V_Ery ist der Quotient aus dem Hämatokritwert und der Erythrozytenkonzentration

V_Ery = { j_Ery / C_Ery },

die mittlere Hämoglobinmasse m_{Hb je Ery} eines Erythrozyten folgt aus dem Quotienten der Massenkonzentration des Hämoglobins und der Erythrozytenkonzentration im Blut

m_{Hb je Ery} = { b_Hb / C_Ery },

die mittlere Erythrozyten-Hämoglobinkonzentration b_{Hb je Ery} erhält man aus dem Quotienten der Massenkonzentration des Hämoglobins und dem Hämatokritwert

b_{Hb je Ery} = { b_Hb / j_Ery }.

Normen

Die folgenden Normen wurden vom Arbeitsausschuss C6 "Hämatologie" des Normenausschuss Medizin (NAMed) im DIN Deutsches Institut für Normung e.V. unter Mitwirkung der PTB erstellt:

DIN 58 931
- Bestimmung der Hämoglobinkonzentration in Blut, Referenzmethode, Februar 1995

DIN 58 932-1
- Bestimmung der Blutkörperchenkonzentration im Blut, Teil 1: Blutentnahme, Probenvorbereitung, Einflußgrößen, Störfaktoren, Dezember 1996

DIN 58 932-2
- Bestimmung der Blutkörperchenkonzentration im Blut, Teil 2: Kennzeichnende Größen für Erythrozyten (Erythrozytenindices), Juni 1998

DIN 58 932-3
- Bestimmung der Blutkörperchenkonzentration im Blut:
  Teil 3: Bestimmung der Konzentration der Erythrozyten (Referenzmethode), April 1994

DIN 58 932-4
- Bestimmung der Blutkörperchenkonzentration im Blut:
  Teil 4: Referenzverfahren zur Bestimmung der Konzentration der Leukozyten, Juli 2003

DIN 58 933-1
- Bestimmung des Volumenanteils der Erythrozyten im Blut, Teil 1: Zentrifugationsmethode als Referenzmethode, Januar 1995

DIN 58 934-1
- Kontrollmaterialien für das Blutbild, Teil 1: Kontrollblute, Dezember 1997

DIN 58 935-1
- Bestimmung der Erythrozyten-Sedimentationsgeschwindigkeit im Blut, Teil 1: Ausgewählte Methode, Dezember 1997

Gesetzliche Grundlagen

Gesetz über Medizinprodukte (MPG, Medizinproduktegesetz) vom 01.01.1995 (zuletzt geändert durch Art. 109V vom 25.11.2003)
Richtlinie der Bundesärztekammer zur Qualitätssicherung quantitativer laboratoriumsmedizinischer Untersuchungen, Anlage 1d: Messgrößen im Vollblut.
Deutsches Ärzteblatt 98, Heft 42, 19.10.2001, Seite A2747-A2759
Deutsches Ärzteblatt 100, Heft 50, 12.12.2003, Seite A3335-A3338
(letzte Änderung durch Beschluss des Vorstandes)

Veröffentlichungen

Springer, W.; Prohaska, W.; Neukammer, J.; Höpe, A.; Baudach, Angela; Steinhauser, Isolde; Ziemer, Sabine; Heller, Silke; v. Rücker, A.
Qualitätskontrollen beim Blutbild: Neues Reagenz zur Stabilisierung von Vollblut bei Erhalt des "Frischblutcharakters".
J. Lab. Med. 21 (1997), 216-220
Springer, W.; Prohaska, W.; Neukammer, J.; Höpe, A.; and v. Rücker, A.
Evaluation of a New Reagent for Preserving Fresh Blood Samples and its Potential Usefulness for Internal Quality Controls of Multichannel Hematology Analyzers.
Am. J. Clin. Path. 111 (1999), 387-396
Höpe, A.; Neukammer, J.
Überprüfung von Kalibrationsmaterial bekannter Teilchenzahlkonzentration zur indirekten Konzentrationsbestimmung von Leukozytensubpopulationen.
Beitrag 2.8.1, Jahresbericht der Physikalisch-Technischen Bundesanstalt (1997), 274